Bathar

Gus tomhas sònraichte a dhèanamh air grunn metabolites de 5-fluorouracil (5-FU) agus dà nucleotides monophosphate endogenous, leasaich sinn dòigh tùsail stèidhichte air cromatagrafaidheachd liùlach - mòr-speactrometry tandem (LC-MS / MS).Leig am measadh seo le bhith a’ dearbhadh: (i) cinneasachadh intracellular de 5-fluoro-2’-deoxyuridine-5’-monophosphate (5-FdUMP) bho 5-FU no 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) buaidh dùmhlachd 5-FdUMP air a’ cho-mheas intracellular 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP), agus (iii) ìre an secretion de 5-FdUMP agus 5-FU bho cheallan cultarach daonna le luchd-còmhdhail ABC.Fo na cumhaichean deuchainneach againn, chaidh ceallan a bhrosnachadh le 5-FU no 5-FUrd.An uairsin, chaidh pròtainean cealla a chuir air falbh le methanol.Thug am modh-obrach seo seachad ath-bheothachadh àrd às-tharraing.A bharrachd air an sin, gus secretion 5-FU agus 5-FdUMP a thomhas bho cheallan, rinn sinn tomhas de na moileciuilean sin ann am meadhan cultair.Chaidh na meadhanan an dàrna cuid a thoirt a-steach gu dìreach (5-FU) no chaidh iad a-mach gu ìre chruaidh le bhith a’ cleachdadh cartridge às-tharraing Oasis Wax (5-FdUMP).Chaidh sgaradh anailitichean a dhèanamh air colbh dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) le modh isocratach a’ cleachdadh bufair ammonium formate / methanol / uisge (5/5/90, v / v) mar ìre gluasadach.Cha robh an ùine ruith nas fhaide na 6.2 min.Chaidh na mion-sgrùdaidhean a ionachadh ann an eadar-aghaidh electrospray fo mhodh ion àicheil.Dhearbh sinn an dòigh thairis air raon de 2.5–150 ng mL −1 a rèir nan todhar.Bha caochlaideachd taobh a-staigh agus eadar-mheasadh nas ìsle na 10% thairis air seachd latha.Bha a h-uile todhar seasmhach ann an ceallan no ann am meadhan cultair nuair a chaidh sampallan a stòradh aig −20 ° C airson co-dhiù dà sheachdain, agus às deidh trì cuairtean reothadh-leaghaidh.Cha deach buaidh matrix sam bith fhaicinn anns an dà mheadhan.