Bathar

Tha mion-sgrùdadh air tachartasan fosphorylation air feadh proteome fhathast na phrìomh dhùbhlan mion-sgrùdaidh air sgàth cho iom-fhillte ‘s a tha lìonraidhean pròtain fosphorylation.Anns an obair seo, bidh sinn a’ measadh co-fhreagarrachd Lys-N, Lys-C, agus trypsin a thaobh an comas cur ri mion-sgrùdadh cruinneil air a’ phosphoproteome.Chaidh dreach ath-leasaichte de iomlaid cation làidir pH ìosal a chleachdadh gus peptides N-terminally acetylated, phosphorylated, agus neo-atharraichte a sgaradh gu h-èifeachdach.Dh’ fhaodadh 5036 phosphopeptides neo-fheumail a bhith air an comharrachadh le ìre lorg meallta de <1% bho 1 mg de phròtain a’ cleachdadh measgachadh de na trì enzyman.Nochd an dàta againn gu robh an tar-lùbadh eadar na seataichean dàta phosphopeptide a chaidh a chruthachadh le diofar proteases beag, ach chaidh a lorg gu robh an tar-tharraing eadar dà sheata dàta tryptic a chaidh a chruthachadh co-dhiù 4 tursan nas àirde.San dòigh seo, leig cleachdadh co-shìnte de Lys-N agus trypsin le àrdachadh 72% anns an àireamh de phosphopeptides a chaidh a lorg an coimeas ri d ri trypsin a-mhàin, ach cha do dh’ adhbhraich deuchainn mac-samhail trypsin ach àrdachadh 25%.Mar sin, nuair a bha sinn ag amas a-mhàin air dàta trypsin agus Lys-N, chomharraich sinn 4671 phosphopeptides nach robh feum air.Sheall tuilleadh mion-sgrùdadh air na làraich a chaidh a lorg gu robh na seataichean dàta Lys-N agus trypsin air am beairteachadh ann an motifan fosphorylation a bha gu math eadar-dhealaichte, a’ nochdadh a bharrachd gu bheil dòighean-obrach multiprotease glè luachmhor ann an mion-sgrùdaidhean phosphoproteome.