Bathar

Bithear a’ cleachdadh salann Tris acetate gu tric ann a bhith ag ullachadh bufair TAE (Tris-acetate-EDTA), a tha air a chleachdadh mar bufair ruith agus ann an gels agarose.Thathas a’ cleachdadh bufair Tris Acetate-EDTA airson electrophoresis gel agarose DNA ach tha e cuideachd air a chleachdadh airson electrophoresis gel agarose RNA neo-nàdurrach.Tha DNA dà-shreath buailteach a bhith a’ ruith nas luaithe ann an TAE na ann am bufairean eile agus dh’ fhaodadh iad a bhith sgìth nuair a bhios electrophoresis leudaichte.Faodaidh cuairteachadh bufair no ath-chur bufair rè electrophoresis leudaichte an comas bufair nas ìsle a leigheas.Faodar a chleachdadh aig diofar cho-chruinneachaidhean gus sgrùdadh a dhèanamh air gluasad DNA ann am fuasgladh.Leis gu bheil borate ann am bufair TBE (Buffer Tris-Borate-EDTA, 10X Powder Pack, sc-296651) na inneal-dìon làidir airson mòran enzyman, thathas a ’moladh bufair TAE nuair a thathar a’ coimhead air tagraidhean enzymatic airson an sampall DNA.Tha salann Tris acetate cuideachd na bhufair le cugallachd àrd ann am measaidhean ATP le firefly luciferase.

A’ cleachdadh: Is e bufair ruith TAE am bufair as cumanta airson electrophoresis gel agarose DNA, agus tha e cuideachd air a chleachdadh airson electrophoresis gel agarose RNA dùthchasach.Tha DNA dà-shreath buailteach gluasad nas luaithe ann an TAE na ann am bufairean eile, ach chan eil e cuideachd a’ snàmh air sgàth dìth ianan bufair rè electrophoresis fada.Faodaidh rothaireachd bufair no iomlaid bufair rè electrophoresis fada dìoladh a dhèanamh airson comas bufair nas ìsle.2 Lùghdaich am bufair TAE dùmhail gus bufair 1 mMTAE fhaighinn anns a bheil 40 mM Tris acetate agus 1 mM EDTA, pH 8.3.Faodar bufair 1 mMTAE a chleachdadh an dà chuid ann an gels agarose agus mar bufair ruith.Airson an rùn as àirde, thathas a’ moladh gum bi an bholtadh gnìomhaichte nas ìsle na 5V / cm (astar eadar dealanan aonad).

Iarrtas: Is e bufair ruith TAE am bufair as cumanta airson electrophoresis gel DNA agarose ann an gel Chemicalbook, agus tha e cuideachd air a chleachdadh airson electrophoresis gel agarose RNA neo-nàdurrach.Tha DNA dà-shreath buailteach gluasad nas luaithe ann an TAE na ann am bufairean eile, ach chan eil e cuideachd a’ snàmh air sgàth dìth ianan bufair rè electrophoresis fada.Faodaidh rothaireachd bufair no iomlaid bufair rè electrophoresis fada dìoladh a dhèanamh airson comas bufair nas ìsle.Chaidh am bufair TAE dùmhail a lagachadh gus bufair 1 mMTAE fhaighinn anns a bheil 40 mM Tris acetate agus 1 mM EDTA, pH 8.3.Faodar bufair 1 mMTAE a chleachdadh an dà chuid ann an gels agarose agus mar bufair ruith.Airson an rùn as àirde, thathas a’ moladh gum bi an bholtadh gnìomhaichte nas ìsle na 5V / cm (astar eadar dealanan aonad).

A 'cleachdadh: Ann a bhith a' lorg ATP le firefly luciferase, is e an toradh seo am bufair as mothachaile;lorg ceangail glutamate.

Ceangal so-ruigsinneach de [3H] searbhag l-glutamic gu stuthan neo-ghlacadair.

[3H] Chaidh sgrùdadh a dhèanamh air ceangal searbhag L-glutamic ri tiùban microfuge agus glainne ann an ceithir bufairean.Cha robh mòran cùl-fhiosrachaidh ceangailteach ris na stuthan sin, ach chaidh àrdachadh le centrifugation no suidseadh ann am bufair Tris-HCl agus Tris-citrate.Bha an ceangal seo mòran nas lugha no Nuair a chaidh bufair HEPES-KOH, no Tris-acetate a chleachdadh na àite.[3H] Chaidh casg a chuir air ceangal L-glutamate ri tiùban microfuge le L- ach chan e D-isomers de glutamate agus aspartate.Cha do chuir searbhag DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic cuideachd bacadh air a’ cheangal.B’ e coimeasgaidhean eile a bha a’ nochdadh casg ìosal gu meadhanach: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, agus 2-amino-4 -phosphonobutyrate.Chaidh bacadh a chuir air ceangal le buill-eanchainn radain neo-nàdurrach.Chaidh ceangal glutamate a bha an urra ri pròtain [3H] fhaighinn le ullachadh membran reòta a chaidh a leaghadh a-rithist nuair a chaidh ceangal a dhèanamh ann am bufair Tris-acetate.Thathas a’ moladh gum bu chòir bufair Tris-acetate no HEPES -KOH a chleachdadh anns an assay bin glutamate bin.Ma thèid bufair Tris-HCl no Tris-citrate a chleachdadh, bu chòir deuchainn smachd iomchaidh a dhèanamh gus ceartachadh airson ceangal ri pìoban microfuge no sìoltachain fiber glainne.