Bathar

Measadh cromatagrafaidheachd liùlach àrd-choileanadh ùr airson glycosyltransferases stèidhichte air derivatization le searbhag anthranilic agus lorg fluorescence.

Chaidh measaidhean a leasachadh a’ cleachdadh a’ cheimigeachd bileagan sònraichte de dh’ aigéad 2-aminobenzoic (2AA; searbhag anthranilic, AA) airson gnìomhachd an dà chuid β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) agus α2-6 sialyltransferase (ST-6) a thomhas le lionn àrd-choileanadh cromatagrafaidheachd (HPLC) le lorg flùraiseach (Anumula KR. 2006. Adhartasan ann an dòighean derivatization fluorescence airson mion-sgrùdadh cromatagrafach leaghaidh àrd-choileanadh air glycoprotein gualaisg. Anal Biochem. 350:1-23).Chaidh N-Acetylglucosamine (GlcNAc) agus N-acetyllactosamine a chleachdadh mar luchd-gabhail agus uridine diphosphate (UDP) -galactose agus cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) mar luchd-tabhartais airson GalT-1 agus ST-6, fa leth.Chaidh toraidhean enzymatic a chomharrachadh in situ le AA agus chaidh an sgaradh bho na fo-stratan air colbh TSKgel Amide 80 a’ cleachdadh suidheachaidhean ìre àbhaisteach.Chaidh aonadan einnsein a dhearbhadh bho na raointean as àirde an coimeas ri inbhean co-chosmhail Gal-β1-4GlcNAc agus NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Chaidh sreathachd (ùine agus dùmhlachd enzyme), mionaideachd (taobh a-staigh agus eadar-mheasadh) agus ath-riochdachadh airson na measaidhean a stèidheachadh.Fhuaireadh a-mach gun robh na measaidhean feumail ann a bhith a’ cumail sùil air gnìomhachd enzyme aig àm aonaranachd agus glanaidh.Bha na measaidhean gu math mothachail agus air an coileanadh co-ionann no nas fheàrr na na tomhasan traidiseanta stèidhichte air siùcar rèidio-beò.Faodar an cruth assay a chleachdadh cuideachd airson gnìomhachd tar-chuir eile a thomhas, cho fad ‘s gu bheil crìoch lughdachadh airson bileagan anns na gabhadairean gualaisg.Chaidh assay airson luchd-gabhail glycoprotein a leasachadh a’ cleachdadh IgG.Chaidh modh pròifil HPLC goirid a leasachadh airson sgaradh glycans IgG (dà-bhliadhnail G0, G1, G2, mono- agus disialylated), a chuidich le bhith a’ dearbhadh gnìomhan GalT-1 agus ST-6 ann an dòigh luath.A bharrachd air an sin, bu chòir an dòigh pròifil seo a bhith feumail airson sùil a chumail air na h-atharrachaidhean ann an glycans IgG ann an suidheachaidhean clionaigeach.